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细胞培养室建立的细节问题

前段时间,经历了几个月的时间,为实验室建了一个细胞培养间。目前这个细胞培养间运转良好,培养的神经元长了10来天,长势不错,已经可以认为细胞培养室建立成功。在建立细胞培养间的过程中,碰到了许多问题,逐一解决后,觉得大家如果要建立细胞培养间,肯定也会碰到许多相同的问题,所以将我碰到的问题整理出来。首先向大家推荐一本书,个人认为是比较经典的——《动物细胞培养-基本技术指南》科学出版社,英,R.I.弗雷谢尼。内容不多,但以下的资料大部分是书上找不到的。

建细胞间的一些细节问题:

1.甲醛薰蒸:

40%甲醛溶液(药用规格、福建三明化工总厂出品),用量30 mlm3,室内温度2124℃,相对湿度75%~85%,加热薰蒸使蒸汽弥漫全室,关闭门窗1 h

甲醛水溶液为无色,具有强烈刺激性气味的液体,可杀灭多数微生物,价廉,熏蒸消毒时不损坏衣服、家具、皮革、橡胶等。市售的甲醛水溶液中一般含3740%的甲醛。其主要用法为:

?①熏蒸消毒:对室内消毒其用量为2025%毫升/米,在加热该溶液时最好同时煮沸一壶水,使室内相对温度保持在70-90%左右,室内温度最好在20摄氏度以上,作用时间12-24小时。如消毒皮毛服装,甲醛水溶液的用量可加至125毫升/,挂衣密度为每平方米3套为宜。熏蒸消毒时应密闭门窗。消毒后一般多用自然通风驱散甲醛气体,其需时较长,急于排出气体,可将25%氨水加热蒸发中和。氨水用量为所用甲醛水溶液的一半,中和时间为30分钟。

?②自然挥发: 将较大量的甲醛水溶液放入一敞开容器中,室内温度保持在18摄氏度以上,同时室内喷水以保持相对湿度在70%以上,经16小时可达到室内消毒的目的。

关于甲酸、甲醛和甲醇三者的毒性比较:甲酸的毒性比甲醇大6倍,甲醛的毒性比甲醇大30倍。所以吃进4-10克甲醇,就能引起慢性中毒。它的毒性作用主要表现在损伤视力,使视力减退(不能矫正),视野缩小,以致双目失明,直到死亡。

实际操作:

我的每个房间是7个平方,约20个立方。按书上的算要福尔马林300ml,高锰酸钾100g

高锰酸钾放入甲醛液体中后,在开始的3秒钟内没有反映,3秒钟以后,会产生大量烟气。所以一旦在甲醛中加了高锰酸钾请马上离开灭菌室,并关上门。

高锰酸钾放入甲醛液体中会使液体沸腾,所以反应要在比较大的大口径容器进行,本人用的是脸盆。

甲醛气体毒性非常强,所以操作时一定要带上防毒面具。

2.关于紫外线:

紫外线的穿透能力非常弱的,主要靠电离产生氧自由基来消毒。细胞培养室里面一些不能照射紫外的物件可以用一般的材料盖住。如:玻璃和有机玻璃都可以的。紫外有些人认为大型精密的显微镜是不可以照紫外的,因为它们的镜头上涂的膜会被分解掉,但我特意问了我校光学系的老师,他们认为是没有关系的。
紫外线在许多实验室被认为是起心理安慰作用的。我参观过的一个细胞培养 间他们的房间大约6平方米,但是只装了30W的紫外灯,但前提是他们有一个层流系统。

个人认为,如果细胞培养间有层流系统,那紫外的作用是可以被忽略的,但如果没有层流系统,那么紫外的作用还是相当重要。
此外,不要担心紫外不能照射到的角落,因为紫外杀菌功能除了紫外本身以外,还可以由产生的臭氧来完成。

臭氧过量吸入的作用应该和双氧水的作用是一样的,个人认为也许有一定的致癌性。所以紫外灭菌以后,最好过一个小时再进去。